超氧陰離子清除能力檢測(cè) 說(shuō)明 技術(shù)文章

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超氧陰離子清除能力檢測(cè)試劑盒

商品貨號(hào)：MS1518
英文名稱：Superoxide anion scavenging capacity Assay Kit
別名：超氧陰離子清除能力試劑盒 超氧陰離子清除能力測(cè)試盒
檢測(cè)方法：微量法

• 產(chǎn)品詳細(xì)介紹
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測(cè)定意義：

超氧陰離子自由基作為生物體代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸和聚不飽和脂肪酸等，使其交鏈或者斷裂，引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞，與機(jī)體衰老和病變有很密切的關(guān)系，清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。

測(cè)定原理：

AP-TEMED系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子，與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2－，NO2－與對(duì)氨基苯磺酸和α－萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物，在530nm處有特征吸收峰，樣品對(duì)超氧陰離子的清除能力與530nm的吸光值呈負(fù)相關(guān)。

• 產(chǎn)品說(shuō)明書

貨號(hào)：MS1518                                      規(guī)格：100 管/96 樣

超氧陰離子清除能力試劑盒說(shuō)明書 微量法

注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

超氧陰離子自由基作為生物體代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂質(zhì)、 蛋白質(zhì)、核酸和聚不飽和脂肪酸等，使其交鏈或者斷裂，引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞，與機(jī)體 衰老和病變有很密切的關(guān)系，清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。

測(cè)定原理：

AP-TEMED 系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子，與鹽酸羥胺反應(yīng)生成 NO₂^－，NO₂^－與對(duì)氨基苯磺酸和 α － 萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物，在 530nm 處有特征吸收峰，樣品對(duì)超氧陰離子的清除能力 與 530nm 的吸光值呈負(fù)相關(guān)。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、研缽、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水 浴鍋。

試劑組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 1.5mL×1 支，4℃避光保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加 6mL 蒸餾水充分溶解。

試劑三：液體 7.5mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 7.5mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑五：液體 7.5mL×1 瓶，4℃避光保存。

樣品處理：

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1mL 提 取液）加入提取液，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。

2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì) 胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）； 然后 4℃，10000g 離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。

3. 培養(yǎng)液或其它液體：直接檢測(cè)。

4. 粉劑藥物可配制成相同濃度，比如 1mg/mL。 

測(cè)定操作：

              空白管   對(duì)照管   測(cè)定管

試劑一（μ L）     10      10       10

試劑二（μ L）            40       40

H2O（μ L）       65      25

        充分混勻，25℃反應(yīng) 1min

樣品（μ L）                     25

試劑三（μ L）     50      50      50

試劑四（μ L）     50      50       50

試劑五（μ L）     50      50      50

          充分混勻，37℃顯色 20min，于微量石英比色皿/96 孔板，以空白管調(diào)零，在 530nm 處測(cè)定對(duì)             照管和測(cè)定管的吸光值，分別記為 A 對(duì)照管和 A 測(cè)定管。 

注意：空白管只需測(cè)定一次。 

計(jì)算公式：

超氧陰離子清除率 I%= (A 對(duì)照管 - A 測(cè)定管) / A 對(duì)照管  x100% 

注意事項(xiàng)：

1. 試劑一 4℃可保存 2 個(gè)月，配制好的試劑二 4℃可保存一周，建議實(shí)驗(yàn)前配制，并盡快使用。

2. 樣品處理完后立即進(jìn)行測(cè)定，或者低溫保存不超過(guò) 24 小時(shí)。

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