乙酰膽堿酯酶（AchE）試劑盒 說明 技術文章

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乙酰膽堿酯酶（Acetylcholinesterase，AchE）試劑盒

商品貨號：QS2000
英文名稱：Acetylcholinesterase(AchE) Assay Kit
別名：乙酰膽堿酯酶試劑盒 AchE Kit 乙酰膽堿酯酶（AchE）試劑盒 乙酰膽堿酯酶（AchE）測試盒
檢測方法：常量法

• 產品詳細介紹
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• 產品說明書

測定意義：

AchE屬于絲氨酸水解酶，廣泛存在于各種動物組織和血清中。AchE催化乙酰膽堿（Ach）水解，在神經傳導調節中起重要作用。

測定原理：

AchE催化Ach水解生成膽堿，膽堿與二硫對硝基苯甲酸（DTNB）作用生成5-巰基-硝基苯甲酸（TNB）；TNB在412nm處有吸收峰，通過測定412 nm吸光度增加速率，計算AchE活性。

貨號: QS2000         規格：50管/48樣

乙酰膽堿酯酶（acetylcholinesterase，AchE）試劑盒說明書

        可見分光光度法

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

AchE 屬于絲氨酸水解酶，廣泛存在于各種動物組織和血清中。AchE 催化乙酰膽堿（Ach） 水解，在神經傳導調節中起重要作用。

測定原理：

AchE 催化 Ach 水解生成膽堿，膽堿與二硫對硝基苯甲酸（DTNB）作用生成 5-巰基-硝基苯 甲酸（TNB）；TNB 在 412nm 處有吸收峰，通過測定 412 nm 吸光度增加速率，計算 AchE 活性。

自備實驗用品及儀器：

可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液槍、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 2.6mL 試劑一，充分震蕩溶解。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 2.6mL 試劑一，充分震蕩溶解。

粗酶液提取：

1. 組織：

按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加 入 1mL 提取液）進行冰浴勻漿，8000g 4℃離心 10min，取上清液待測。

2. 細菌、真菌：

按照細胞數量（10⁴個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時 間 3min）；然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

3. 血清等液體：直接測定。

測定操作：

1. 分光光度計預熱 30 min，調節波長到 412 nm，蒸餾水調零。

2. 試劑二置于 37℃水浴中預熱 30min。

3. 取 1mL 玻璃比色皿，依次加入 100μ L 上清液、800 μ L 試劑一、50μ L 試劑二和 50 μ L 試 劑三，迅速混勻，于 412nm 處測定 3min 內吸光值變化，第 10s 吸光值記為 A1，第 190s 吸光 值記為 A2。△A 測定管=A2-A1。

注意：空白管只需測定一次。

AchE 活性計算公式：

1. 組織 AchE 活性

（1）按照蛋白濃度計算 活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘催化產生 1nmol TNB 的酶量為 1 個酶活單位。

AchE 酶活(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε ÷d×V 反總×10⁹ )÷（Cpr ×V 樣）÷T = 245×△A÷Cpr

（2）按照樣本質量計算

活性單位定義：每克組織每分鐘催化產生 1nmol TNB 的酶量為 1 個酶活單位。

AchE 酶活(nmol/min/g 鮮重)= (△A÷ε ÷d×V 反總×10⁹ )÷（W ×V 樣÷V 樣總）÷T = 245×△A÷W

2. 細菌、細胞 AchE 活性

活性單位定義：每 10⁴個細胞每分鐘催化產生 1nmol TNB 的酶量為 1 個酶活單位。

AchE 酶活(nmol/min/10⁴ cell)= (△A÷ε ÷d×V 反總×10⁹ )÷（細胞數量×V 樣÷V 樣總）÷T = 245×△A÷細胞數量

3. 血清 AchE 活性

活性單位定義：每毫升血清每分鐘催化產生 1nmol TNB 的酶量為 1 個酶活單位。

AchE 酶活(nmol/min /mL)= (△A÷ε ÷d×V 反總×10⁹ )÷V 樣÷T =245×△A

ε ：TNB 摩爾消光系數，13.6×10³ L/mol/cm；V 反總：反應體系總體積（L），1 mL=0.001 L； 10⁶：1mol=1×10⁶ μ mol；V 樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：蛋白濃度（mg/mL）；W：樣本 質量，g；V 樣：加入上清液體積（mL），0.1 mL；T：反應時間（min），3 min。

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